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萊克多巴胺ELISA檢測試劑盒操作指南

一、操作前準(zhǔn)備

?試劑平衡?

取出試劑盒后，需在室溫（20-25℃）平衡至少20分鐘，避免試劑溫差導(dǎo)致吸光度異常。

?儀器校準(zhǔn)?

檢查移液槍準(zhǔn)確性（誤差≤2%），建議使用專業(yè)校準(zhǔn)工具或電子天平驗證。

二、標(biāo)準(zhǔn)品與樣本處理

?標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋?

按說明書進行倍比稀釋（示例濃度：180 ng/L至15 ng/L），每孔最終加樣量為50μL。

稀釋時避免氣泡產(chǎn)生，槍頭需接觸孔壁使液體自然流下。

?樣本加樣?

樣本孔加50μL待測樣本（如尿液、組織勻漿液），若需稀釋則加入40μL稀釋液混合。

空白孔不加樣本或試劑，僅用于調(diào)零。

三、反應(yīng)流程

?抗體結(jié)合?

每孔加入100μL辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記抗體，封板后37℃溫育60分鐘。

溫育時用不干膠密封板孔，防止水分蒸發(fā)。

?洗滌步驟?

棄去液體后，每孔加滿洗滌液（含0.05%吐溫-20），靜置1分鐘甩干，重復(fù)5次。

手工洗板需在吸水紙上用力拍干，避免殘留液體干擾結(jié)果。

四、顯色與檢測

?底物反應(yīng)?

每孔依次加入底物A液和B液各50μL，37℃避光顯色15-20分鐘（顏色較淺可延長至20分鐘）。

顯色過程需避光，避免底物提前分解。

?終止反應(yīng)?

加入50μL終止液（2M硫酸），5分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長讀取OD值。

五、結(jié)果分析

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣本中萊克多巴胺含量（吸光度與濃度呈負(fù)相關(guān)）。

檢測下限參考：廠家說明書

六、注意事項

?溫度控制?

最佳反應(yīng)溫度為25℃，高溫或低溫可能導(dǎo)致靈敏度偏差。

?試劑儲存?

未使用的酶標(biāo)板需密封后4℃保存，標(biāo)準(zhǔn)品和底物液避光存放。

?避免污染?

不同試劑批次不可混用，槍頭、容器需一次性使用。

?質(zhì)控要求?

樣本回收率應(yīng)控制在80%-120%（組織/飼料）或95%±10%（尿液）。

若0標(biāo)準(zhǔn)孔OD值＜0.5，提示試劑可能失效。

七、異常處理

?顯色異常?：底液變色立即棄用，檢查酶標(biāo)板是否過期。

?板孔干燥?：洗板后立即進行下一步，避免干燥導(dǎo)致曲線失真。

通過以上步驟，可在45-60分鐘內(nèi)完成檢測，適用于批量篩查。