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一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1. 試劑準(zhǔn)備：

   將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25°C）平衡30min以上，確保試劑溫度穩(wěn)定。

   注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2. 微孔板處理：

   取出所需數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放回原錫箔袋中，與提供的干燥劑一起重新密封，并保存于2～8°C。切勿冷凍。

3. 洗滌液準(zhǔn)備：

   洗滌液在使用前也需回溫至室溫。

   
   

二、實(shí)驗(yàn)過程

1. 加樣與加標(biāo)：

   編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

   加樣：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本100μL到對(duì)應(yīng)的微孔中，然后加伊維菌素抗試劑50μL/孔，輕輕振蕩混勻。

2. 反應(yīng)與溫浴：

   使用蓋板膜將微孔板蓋好，置于25°C避光環(huán)境中反應(yīng)30min。

   注意溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定，以保證反應(yīng)充分進(jìn)行。

3. 洗滌：

   小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液250μL/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s。

   用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

4. 顯色：

   加入底物液A液50μL/孔，再加底物液B液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25°C避光環(huán)境中反應(yīng)15min。

   底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

5. 測定：

   加入終止液50μL/孔，輕輕振蕩混勻。

   設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測），測定每孔OD值（若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測法可進(jìn)行判定）。

   測定應(yīng)在加入終止液后的5min內(nèi)完成，以保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。

   
   

三、注意事項(xiàng)歸納

1. 溫度控制：確保試劑和樣本在檢測前達(dá)到室溫，溫浴時(shí)間嚴(yán)格遵守試劑盒規(guī)定。

2. 洗滌：洗滌步驟是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，確保洗滌徹底，減少非特異性吸附。

3. 底物處理：底物需臨用前現(xiàn)配，并避免長時(shí)間暴露于光下。

4. 加樣準(zhǔn)確性：注意加樣量的準(zhǔn)確性，盡量使用量程和需要量接近的移液槍，減少誤差。

5. 平行實(shí)驗(yàn)：建議進(jìn)行雙孔平行實(shí)驗(yàn)，以提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

6. 結(jié)果判定：若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

   
   

遵循以上注意事項(xiàng)，可以確保伊維菌素含量檢測的準(zhǔn)確性和可靠性。