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沙門氏菌是一種較常見的食源性腸道致病菌，是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬，其抗原結(jié)構(gòu)主要由菌體抗原( O 抗原) 、鞭毛抗原( H 抗原) 及表面抗原( Vi 抗原等) 3 部分組成。根據(jù)各抗原組成的不同，可將沙門菌分為不同的血清型，目前已確認(rèn)的有2 600多種血清型，我國已檢出 300 余種。

由不同血清型沙門氏菌引發(fā)的疾病類型會(huì)有所差異，沙門氏菌血清型的準(zhǔn)確快速鑒定對(duì)暴發(fā)流行中的溯源分析具有重要意義。實(shí)時(shí)熒光 PCＲ 法和傳統(tǒng)的玻片凝集法是沙門氏菌血清分型的兩種不同檢測(cè)方法，本研究對(duì)比兩種方法在實(shí)驗(yàn)操作、檢測(cè)成本及靈敏度等方面的差異，了解實(shí)時(shí)熒光 PCR檢測(cè)技術(shù)在沙門氏菌血清分型中的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

菌株來源

144 株沙門菌分離來自不同樣本。

比對(duì)方法

玻片凝集法，和實(shí)時(shí)熒光PCR法（美正生物沙門菌血清型分子鑒定試劑盒）

01方法介紹

玻片凝集法

將 144 株待檢測(cè)的沙門氏菌株分別接種于血瓊脂平板，37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 18 ～ 24 h后，進(jìn)行玻片血清凝集反應(yīng)。先做 O 多價(jià)血清，再做O 單價(jià)血清，確定 O 群后再做 H 多價(jià)及 H 單價(jià)血清。將 O、H 相凝結(jié)果與 Kaufmann-White 沙門氏菌抗原表對(duì)照，檢索出血清型。

實(shí)時(shí)熒光PCR法

北京美正生物科技有限公司的沙門氏菌血清型分子鑒定試劑盒是根據(jù)沙門氏菌種編碼抗原基因特異性進(jìn)行高通量篩選，最終篩選出 12 個(gè)沙門菌基因，并以此建立沙門氏菌血清型數(shù)據(jù)庫，此數(shù)據(jù)庫目前包含 128種常見沙門氏菌血清型。采用實(shí)時(shí)熒光 PCＲ 技術(shù)檢測(cè)待測(cè)菌株目的基因，記錄樣品不同預(yù)混液( MSS01-MSS12) 對(duì)應(yīng)通道的 Ct 值，并將其轉(zhuǎn)化為單重?cái)喽ㄊ?#xff0c;輸入試劑盒配套的沙門血清鑒定表，得到血清型鑒定結(jié)果。

02統(tǒng)計(jì)分析

采用 SPSS 22. 0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以玻片凝集法鑒定結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)實(shí)時(shí)熒光 PCＲ 法進(jìn)行效果評(píng)價(jià)，統(tǒng)計(jì)指標(biāo)包括靈敏度、特異度、約登指數(shù)，并將兩種方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行 Kappa 一致性檢驗(yàn)，若 Kappa 值＞0. 5，則說明一致性較好。以 P＜0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

03結(jié)果分析

實(shí)時(shí)熒光 PCＲ 法檢測(cè)結(jié)果中，與玻片凝集法的鑒定結(jié)果完全一致 134株，且 4 種優(yōu)勢(shì)血清型( 德爾卑沙門菌、鼠傷寒沙門菌、姆班達(dá)卡沙門菌和里森沙門菌) 結(jié)果完全一致; 與玻片凝集法不一致菌株 10 株，分別為倫敦沙門菌、嬰兒沙門菌、紐波特沙門菌、西安普頓沙門菌、恩戈?duì)柹抽T菌、阿伯丁沙門菌、羅森沙門菌、伊麗莎白維爾沙門菌、羅米他沙門菌各 1 株?？赡芘c致病菌自身部分待測(cè)基因環(huán)境或宿主的改變發(fā)生突變，進(jìn)而基因組呈現(xiàn)多樣性有關(guān)。4 種沙門菌優(yōu)勢(shì)血清型兩種方法分型結(jié)果完全一致，且此血清型分布與 2017年無錫市食品行業(yè)從業(yè)人員沙門菌血清分布基本一致。

04總結(jié)討論

玻片凝集法直觀且可靠性高，是目前公認(rèn)的沙門菌血清分型金標(biāo)準(zhǔn)。但耗時(shí)長，操作過程復(fù)雜，需嘗試的血清診斷試劑較多，鑒定成本高，常要受制于試劑種類與質(zhì)量優(yōu)劣，且需多次誘導(dǎo)時(shí)具有一定鑒定難度。部分粗糙型自凝性沙門菌利用玻片凝集法不能進(jìn)行分型。個(gè)別情況下沙門菌的抗原與血清凝集反應(yīng)程度較弱，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)和操作水平要求高。

實(shí)時(shí)熒光 PCＲ 法是基于目標(biāo)基因簇中特定區(qū)域或基因片段，操作簡單，不易出現(xiàn)差錯(cuò)，對(duì)普通實(shí)驗(yàn)人員來說從分離培養(yǎng)、提取核酸到檢測(cè)、記錄 Ct 值、確定血清分型最多僅需要 1 d，且常規(guī)的一塊 96 孔 PCＲ 板可以同時(shí)檢測(cè) 8 份樣本，極大縮短了檢測(cè)時(shí)間。但實(shí)時(shí)熒光 PCＲ 法對(duì)一些不常見、存在交叉情況的血清型鑒定時(shí)，尚無法準(zhǔn)確判斷沙門菌血清型。

采用實(shí)時(shí)熒光 PCＲ 檢測(cè)技術(shù)效果良好，尤其當(dāng)檢測(cè)量較大時(shí)，檢測(cè)效率較高; 對(duì)較不常見或血清型存在交叉的菌株，在實(shí)時(shí)熒光 PCＲ 法的基礎(chǔ)上，再有針對(duì)性地進(jìn)行凝集試驗(yàn)，可省去逐一用血清試劑做凝集反應(yīng)的繁瑣步驟。

（文章來源：王雅靜,管紅霞,沙丹等.實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)在沙門菌血清鑒定中的應(yīng)用[J].江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué),2023,34(01):105-107.）

美正生物沙門氏菌血清鑒定產(chǎn)品系列